실험4

• 

  인산 완충 용액의 조제 및 확인 실험 과목명 : 분석화학 및 실험 1) 실험 목적 외부에서 산이나 염기가 투입되거나 또는 희석되는 경우에도 고유의 pH를 유지하려는 성질을 가진 완충용액(Buffer solution; buffer)을 만든다. 그리고 산과 염기를 투입하여 그 완충성능을 테스트한다. 2) 실험 이론 완충용액은 일반적으로 생화학 분야에서 널리 이용되며, 반응 수율이 용액의 pH 에 따라 크게 영향을 받는 액상 정밀화학반응에서도 광범위하게 사용된다. 완충용액의 pH 계산식인 Henderson-Hasselbalch 식을 사용하여 인산 완충용액의 이론적 pH를 계산 후 pH meter를 사용한 실측 값과 비교한다 3) 실험 기구 및 시약 4) 실험방법 6)고찰 이번 실험에서 널리 사용되는 완충용액 중 하나인 인산 완충용액을 조제하고 p.. Experiment/Report 2022. 7. 10.

• 

  MTT assay protocol MTT ASSAY PROTOCOL (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) tetrazolium reduction assay 1. 96well에 세포를 깔아 배양. total volume 180ul 세포 종류마다 양이나 기간은 달라질 수 있으며, 적절한 흡광도 (0.2 ~ 0.8)이 나오도록 결정. 2. 측정 시료가 있다면 PBS에 녹여 농도별로 well에 첨가하여 24시간 인큐베이팅. 배지 80ul 제거 후 시료 100ul 첨가 2. media suction 후 pbs washing 3. 이후 시료를 제거하고 각 well에 mtt 시약(농도에 다르지만 2mg/ml, 30-50ul or 5mg/ml 20ul) 을 첨가합니다. 4. 일.. Experiment/Basic & Protocol 2022. 6. 22.

• 

  Cell culture Protocol 1. 동결 해지 (Thawing) -> 세포 배양 (Cell culture) 1) -70℃ 또는 액체질소에 보관 하던 세포를 꺼내와 Water bath 37℃에서 빠르게 녹여준다. 2) 녹인 세포를 Conical tube에 옮긴 후 Media 3ml (양 중요 x) 넣고 Centrifuge 돌려준다. 3) Centrifuge에서 tube를 꺼내고 Pellet(가라앉은 세포)만 남기고 배지를 Suction 해준다. 4) Pellet만 남은 Tube에 새로 Media를 2ml 넣고 Resuspension 해준다. 5) Dish에 Media 9ml을 넣어주고 4)의 세포 2ml을 넣어준 후 수평방향으로 살살 흔들어준다. 6) Dish를 Incubator에 조심히 넣어둔다. 2. Sub-Culture 1) Wa.. Experiment/Basic & Protocol 2022. 3. 26.

• 

  Thermo Fisher Week 1 실험실 기초 장비 안전 2022.03.03 세포 배양에 이어 실험실 기초 장비 안전 사용법 강의가 진행되었다. 실험실 오염 방지와 실험자 안전을 위한 솔루션 목적: 장비 유지 및 보수를 통한 샘플 보호 BSC Bio Safey Cabinet 올바른 사용 및 관리법 클린 벤치(무균대) ≠ BSC 차이점 클린 벤치 : 공기 흐름이 수평, 실험 물질이 클린벤치 밖으로 흘러 나옴, 사용자 보호 불가능 -> 세포 배양용 x BSC : 실험 물질이 밖으로 나오지 않게 됨, 사용자와 샘플 둘 다 보호 가능 손을 넣었을 떄 바람이 수평 방향으로 나에게 오는 게 느껴지면 클린벤치 BSC Type 공기 내부 순환 차이 생물 안전 등급, 바이러스 위험군 1~3등급 권장 HEPA필터는 기체 못거름 ex) 마스크가 담배 냄새를 거르지 못하는 것 처럼.. Thermo Fisher 강의 정리 2022. 3. 26.