Experiment/Basic & Protocol3

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  MTT assay protocol MTT ASSAY PROTOCOL (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) tetrazolium reduction assay 1. 96well에 세포를 깔아 배양. total volume 180ul 세포 종류마다 양이나 기간은 달라질 수 있으며, 적절한 흡광도 (0.2 ~ 0.8)이 나오도록 결정. 2. 측정 시료가 있다면 PBS에 녹여 농도별로 well에 첨가하여 24시간 인큐베이팅. 배지 80ul 제거 후 시료 100ul 첨가 2. media suction 후 pbs washing 3. 이후 시료를 제거하고 각 well에 mtt 시약(농도에 다르지만 2mg/ml, 30-50ul or 5mg/ml 20ul) 을 첨가합니다. 4. 일.. Experiment/Basic & Protocol 2022. 6. 22.

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  Cell culture Protocol 1. 동결 해지 (Thawing) -> 세포 배양 (Cell culture) 1) -70℃ 또는 액체질소에 보관 하던 세포를 꺼내와 Water bath 37℃에서 빠르게 녹여준다. 2) 녹인 세포를 Conical tube에 옮긴 후 Media 3ml (양 중요 x) 넣고 Centrifuge 돌려준다. 3) Centrifuge에서 tube를 꺼내고 Pellet(가라앉은 세포)만 남기고 배지를 Suction 해준다. 4) Pellet만 남은 Tube에 새로 Media를 2ml 넣고 Resuspension 해준다. 5) Dish에 Media 9ml을 넣어주고 4)의 세포 2ml을 넣어준 후 수평방향으로 살살 흔들어준다. 6) Dish를 Incubator에 조심히 넣어둔다. 2. Sub-Culture 1) Wa.. Experiment/Basic & Protocol 2022. 3. 26.

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  Complete Meida 아래 내용은 HaCat 세포 기준이며 세포마다 Media 성분 및 조성은 달라진다. Complete Media (50ml) : FBS 5ml(10%), P/S 0.5ml(1%) , F-12배지 44.5ml 1. FBS, p/s 를 -70℃ 냉동실에서 꺼내 water bath 약 37℃ 에서 빠르게 해동시켜준다. 2. FBS를 conical tube에 10% (5ml) 채워준다 3. p/s를 1% (0.5ml) 채워준다. 4. conical tube의 50ml까지 DMEM/F-12 배지로 채워 마무리한다. 시약 정보 FBS : Fetal Bovine Serum 소 태아 혈청 (혈액 중 혈구와 섬유소원을 제거한 액체 성분) 1. 세포 성장과 기능에 관여하는 호르몬 제공 2. 세포의 부착과 확산인자 제공 3... Experiment/Basic & Protocol 2022. 3. 26.