MTT assay protocol

MTT ASSAY PROTOCOL
 (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) tetrazolium reduction assay

1. 96well에 세포를 깔아 배양. total volume 180ul
세포 종류마다 양이나 기간은 달라질 수 있으며, 적절한 흡광도 (0.2 ~ 0.8)이 나오도록 결정. 
2. 측정 시료가 있다면 PBS에 녹여 농도별로 well에 첨가하여 24시간 인큐베이팅. 배지 80ul 제거 후 시료 100ul 첨가
2.  media suction 후 pbs washing
3. 이후 시료를 제거하고 각 well에 mtt 시약(농도에 다르지만 2mg/ml, 30-50ul or 5mg/ml 20ul) 을 첨가합니다.
4. 일정 시간 인큐베이팅 후 mtt시약을 제거하고 각 well에 DMSO(100-200ul)를 첨가합니다.
5. 일정 시간 두거나 plate shaker로 흔들어 줍니다. 30m
6. ELISA Reader를 사용하여 wave length 540nm에서 흡광도를 측정합니다.


살아있는 세포에 MTT를 처리하게 되면, MTT가 미토콘드리아에 있는 환원효소에 의해 환원되어 formazan이라 불리는 crystal을 형성하게 된다.

죽은 세포에서는 미토콘드리아가 없기 때문에 효소도 존재하지 않고 따라서 formazan도 형성되지 않습니다. 살아있는 세포의 수가 많을 수록 이 크리스탈의 생성도 많아지므로 이러한 방법을 통해 세포의 성장을 측정할 수 있다.

약제 및 독성 물질의 세포독성 또는 세포증식 억제 활성을 측정하는 데 사용할 수 있다