Thermo Fisher Week 1 세포배양 기초

 

2022.03.03 Thermo Fisher에서 온라인에서 세포배양 관련으로 강의를 진행한다고 해서 신청하게 되었다.
지난 겨울 방학 때 실험실에 나와 세포를 배양하며 간단한 실험들을 진행하였지만 직접 검색하며 진행하였기에 부정확하게 알고 있는 부분이 있을 수 있고, 따로 강의를 들은 적이 없어 좋은 기회라고 생각했다.

1. 세포 배양의 목적
-> 생물의 조직이나 기관으로부터 분리한 세포를 체외에서 증식시키는 방법, 체내와 유사한 조건을 제공하여 배양
다양한 목적 : Basic cell Biology, Cancer Research, Protein Production, Cell Theraphy
Organ -> Primary culture -> Sub-Culture : 제한적인 계대 수
Organ -> Primary culture -> Transformation -> Sub-Culture -> Cell line / Cell strain : 무한하게 지속되는 세포성장

2. 배양 세포의 종류
Adherenet cell (부착세포) : 주로 길쭉하며 규칙적인 모양
Suspension cell (부유세포) : 주로 둥글며 떠 있음

3. 세포 배양에 사용되는 용기
-Culture Dishes : 세포에 물질을 처리할 때 주로 사용
-Culture Flask (T-Flask) : 세포 증식에 사용되며 T25 ~T175까지 사이즈 존재
-Culture Plate : 형광 또는 발광 실험에서 주로 사용
-Roller bottles (Shaker Flask) : Suspension cell 대량 배양 시 사용

Polystyrene(PS) : 소수성으로 표면장력이 큼 컬처방울이 뭉치게 됨 – 적절한 표면 처리(Surface modification) 필요
제품 : Nunclon Delta surface

Adherent cell 용기 : 약한 음전하를 띤 유리 용기 또는 적당한 전하를 띄도록 처리된 polystyrene 같은 플라스틱 사용, 세포 주에 따라 collagen, poly-d-lysine, fibronectin 등의 ECM solution 코팅이 필요

Suspersion cel 용기 : Tissue culture treat가 되어있지 않은 용기, 적절한 가스 교환을 위해 Shaking이나 Stirring이 요구

4. 배지 및 supplement
Basal media (기본 배지) : 세포 배양에 기본적으로 필요한 물질 제공
Ingredient - 아미노산 : 에너지 생산 / L-glutamine / 필수, 비필수 아미노산
- 탄수화물 : 에너지 생산 / D-glucose
- 비타민 : 대사과정 보조인자 / Folic acid, Biotin 등
- 이온 : 배지 삼투압 결정
TYPES : MEM (Minimum Essential Medium) / MEM alpha / DMEM / RPMI media 1640 / IMDM / Ham's F12
-Liquid Media (LM), Dry Powder Media (DPM), Advanced granulation technology (AGT) 과립형
Gibco 배지 조성 정보 : thermo fisher 홈페이지에서 각 배지의 성분 조성 확인 가능 / Cell culture media formulation tool, cell line 별 특징 추천 제품 확인 가능
pH : Phenol red 7.0-7.4

FBS (Fetal Bovine Serum) : 우태아혈청, 세포에 영양분 공급, 혈청(혈액의 일부로 세포와 피브리노겐을 제외한 나머지 액체 성분)
장점
-다른 종 및 성체의 혈청에 비해 항체, 거대 단백질, 지질 등이 덜 포함되어 있어 일반적으로 사용
- 세포 성장에 관여하는 다양한 인자의 집약체
단점
-Lot to Lot variation
-unknown factor 함유
Handling tip
혈청 보관 : 냉동 보관 (-5 ~ -20도씨)
혈청 해동 : 2~8도씨 overnight
혈청의 비활성화 (Heat inactivicatoin) : 체액성 면역을 담당하는 인자의 독성을 없애주기 위함
56도씨에 10분 넣은 후 shaking x 3

Supplement : 세포 오염 방지 및 영양 공급
Conical tube / pipet / pipette Aid
장비 : BSC, CO2 incubators, centrifuge, water baths, cell imaging system, cell counter

세포배양 - 세포동결(cryopreservation)
Cell harvest -> Centrifuge 200xg for 5min -> add freezing media -> transfer content -> -70 deep freezer
Freezing Media (동결배지) : complete media or serum + 동결보호제; DMSO 10%